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2023熒光蛋白激發(fā)觀測的新方法

更新時間:2023-04-24   點擊次數:937次

綠色熒光蛋白激發(fā)觀察方法

隨著時代科技發(fā)展進步,觀察熒光蛋白的技術也越來越便捷,傳統(tǒng)的熒光顯微鏡觀測熒光蛋白有很多局限性,美國路陽生產的便攜式熒光蛋白激發(fā)觀測燈給轉基因研究工作者帶來了便捷性,無需取樣,打開觀測燈直接照射熒光蛋白,肉眼就能清晰看到熒光蛋白在葉片、愈傷、種子、菌落等載體上的表達。無論是綠色熒光蛋白、黃色熒光蛋白或紅色熒光蛋白,一臺觀測燈就能直接觀測2種熒光蛋白的表達?,F(xiàn)工程師針對綠色熒光蛋白的觀測原理、幾種觀測方法介紹如下


綠色熒光蛋白(GFP):

綠色熒光蛋白(GFP),是一個由約238個氨基酸組成的蛋白質,從藍光到紫外線都能使其激發(fā),發(fā)出綠色螢光,在細胞生物學與分子生物學中,綠色螢光蛋白(GFP)基因常用做報告基因。綠色螢光蛋白基因也可以克隆到脊椎動物(例如:兔子)上進行表現(xiàn),并拿來映證某種假設的實驗方法。通過基因工程技術,綠色螢光蛋白(GFP)基因能轉進不同物種的基因組,在后代中持續(xù)表達?,F(xiàn)在,綠色螢光蛋白(GFP)基因已被導入并表達在許多物種,包括細菌,酵母和其他真菌,魚(例如斑馬魚),植物,蒼蠅,甚至人等哺乳動物的細胞。

GFP吸收的光譜峰值為395nm(紫外),并有一個峰值為470nm的副吸收峰(藍光);發(fā)射光譜峰值為509nm(綠光),并帶有峰值為540nm的側峰。雖然450~490nm只是GFP的副吸收峰,但由于該激發(fā)光對細胞的傷害小,因此通常多使用該波段光源(多為488nm)。GFP熒光極其穩(wěn)定,在激發(fā)光照射下,GFP抗光漂白能力比熒光素強,特別是在450~490nm藍光波長下穩(wěn)定。類似的,GFP融合蛋白的熒光靈敏度遠比熒光素標記的熒光抗體高,抗光漂白能力強,因此適用于定量測定與分析。由于GFP熒光的產生不需要任何外源反應底物,因此GFP作為一種廣泛應用的活體報告蛋白,其作用是任何其它酶類報告蛋白比不上的。但因為GFP不是酶,熒光信號沒有酶學放大效果,因此GFP靈敏度可能低于某些酶類報告蛋白,比如螢火蟲熒光素酶等。

由于熒光蛋白能穩(wěn)定在后代遺傳,并且能根據啟動子特異性地表達,在需要定量或其他實驗中慢慢取代了傳統(tǒng)的化學染料。更多地,熒光蛋白被改造成了不同的新工具,既提供了解決問題的新思路,也可能帶來更多有價值的新問題。

綠色熒光蛋白的激發(fā)觀察方法

1. 紫外光源
采用LUYOR-3410UV便攜式紫外光源(又叫高強度紫外線燈、黑光燈)觀察也非常方便,但如果觀察植物,植物葉片的葉綠色在紫外線燈下也會發(fā)出熒光,對gfp發(fā)出的熒光也會產生干擾,另外,標本長時間在紫外光源照射下對GFP標本組織也會造成破壞。

便攜式GFP激發(fā)光源
采用LUYOR-3415RG便攜式GFP激發(fā)光源(又叫熒光蛋白觀測鏡、熒光蛋白激發(fā)觀測燈)是便捷、方便的觀察方法,因GFP在470nm有一個很高的吸收峰,采用 470nm激發(fā)光源能夠激發(fā)GFP發(fā)出明亮的綠色熒光,在觀察gfp熒光時,因為激發(fā)光為強烈的藍色光線,佩戴專業(yè)的觀察眼鏡才能觀察到清晰的熒光信號。

GFP煙草表達效果圖.jpg


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